• • Александр 9 сентября 2021
  • Спасибо Руслану за хороший ремонт все зделали в срок
  • подробнее
• • Константин 23 июня 2021
  • Благодарим Руслана и его работников за качественный и быстрый ремонт квартиры! Сами мы живем в другом городе, дочери-студентке купили квартиру, и нужен был качественный, быстрый и недорогой ремонт. Через интернет…
  • подробнее
• • Виктор 10 июня 2021
  • Скажу спасибо Руслану и его команде! Мне понравилось, как они отработали в моей квартире. Мой бюджет был ограничен, поэтому запросил только те работы, которые не смог сделать сам – стяжка…
  • подробнее
• • Ольга 7 июня 2021
  • Хочу сказать огромное спасибо за быстро и качественно проведенный ремонт. И отдельно поблагодарить Руслана. Я начала обзванивать разные организации еще на стадии покупки квартиры с целью приблизительно представить себе стоимость…
  • подробнее
• • Дмитрий 20 апреля 2020
  • И вот дошло дело до моего первого ремонта в 2018 году. После поисков бригад остановился на Ас-Строе во главе с Русланом. Взяли вверх компетенции, советы, подсказки что да как лучше…
  • подробнее
• • Маргарита 23 марта 2020
  • Спешу поблагодарить вас за качественно проделанную работу! неделю назад в моей квартире закончился ремонт , работала бригада , под руководством Руслана, работа была слаженной, оперативно решались все вопросы! свои 80 квадратов…
  • подробнее
• • Петр 23 марта 2020
  • Очень понравился подход АSстрой к своей работе! Обратился для ремонта своей квартиры (130 кв.метров) в середине ноября, а работу принял уже в конце февраля. Замечаний нет. Очень доволен. Мебель в квартиру также заказал через компанию, помогли подобрать и обставить… Всем рекомендую
  • подробнее
• • Татьяна Александровна 3 мая 2019
  • Нам очень понравилась работа бригады Руслана Угурчиева. Сделали нам ванную комнату очень быстро и качественно. Спасибо ребята.
  • подробнее
• • Соснов Илья владимирович 12 апреля 2019
  • Делали капремонт в бабушкиной двухкомнатной хрущевке по адресу,ул карла маркса 3 а.Все сломали и вывезли,штукатурка,стяжка,наливные полы,шпатлевка,гидроизоляция,кафель,электромонтажные работы,сантехнические работы.Итог капитальных косяков в работе не было.Недочеты устранялись без лишних слов и…
  • подробнее
• • Светлана 23 октября 2018
  • Спасибо вам большое за потрясающий ремонт, все выполнили в срок, качественно и недорого, а наше знакомство началось с того, что я пригласила более 10 компаний по ремонту, но здесь сразу…
  • подробнее
• • Денис 14 августа 2018
  • Ребята молодцы! Работают быстро, а самое главное качественно. Буду продолжать с ними сотрудничать при продолжении ремонта.
  • подробнее
• • Антон Михайлович Ж. 15 июля 2018
  • Хочу выразить огромную благодарность Руслану Угурчиеву, как замечательному руководителю и организатору ремонтно-отделочных работ. Бригада Руслана работает быстро, качественно и слаженно. А сам Руслан очень активно участвует в процессе ремонта. В…
  • подробнее
• • Мария 25 апреля 2018
  • С Русланом работаем второй раз. В 2014 году делали капитальный ремонт в хрущевке, и сейчас, проанализировав цены на рынке – опять выбрали его фирму. Соотношение цена-качество хорошее, весь ремонт выполнен…
  • подробнее
• • Татьяна 1 ноября 2017
  • Хотелось бы выразить огромное спасибо компании АС-Строй и лично руководителю ремонтных работ Руслану. Ремонт выполнен качественно с учетом всех наших запросов. Демонтаж, черновая и чистовая отделка, электрика, сантехника все выполнено…
  • подробнее
• • Татьяна Николаевна 30 октября 2017
  • Так сложились обстоятельства, что мне за очень короткий срок нужно было сделать ремонт в частном доме .Обратилась к Руслану Угурчиеву. Хочу от всего сердца поблагодарить его – ремонт был сделан за считанные дни и качеством работ я осталась очень довольна .Спасибо ,Руслан .
  • подробнее
• • Екатерина 24 августа 2017
  • Хочу выразить огромную благодарность Угурчиеву Руслану и его команде. Ремонт осуществлялся в 2х комнатной квартире – черновые работы, электрика, потолки, стены, пол, все сделано достаточно качественно. Вначале были обсуждены все…
  • подробнее
• • Татьяна Викторовна. Горный 21 июля 2017
  • Это страшное слово РЕМОНТ! Пугает многих, но “хочешь не хочешь, а начинать надо”. Вот и я морально и материально готовила себя к нему, внутреннее уже настраиваясь на все тяготы и…
  • подробнее
• • Александр
  • Делали ремонт 1к квартиры – выравнивание полов, штукатурка стен, укладка ламината, поклейка обоев, натяжные потолки и всякие мелочи. Всю работу сделали хорошо и быстро с минимальным вовлечением заказчика. Все демонтированные…
  • подробнее
• • Любовь Анатольевна
  • ASстрой на днях закончил полную отделку в новой 2-комнатной квартире моих родителей. Огромное СПАСИБО! Профессионально и качественно! В срок и с индивидуальным подходом! Приятно иметь дело с хорошими людьми и…
  • подробнее
• • Андрей
  • Делали капитальный ремонт по проекту. Задача была сделать по проекту весь ремонт за 3 месяца. Ребята в срок уложились, все удалось реализовать. Спасибо за проделанную работу компании AS-stroy в лице Угурчиева Руслана
  • подробнее

50494544403938373634333228242319131087

сквозь строй – это… Что такое сквозь строй?

для http://findface.ru

подсказка №1: Заголовок “cache-control” или пустое значение не найдены. Он должен иметь значение

http://findface.ru/

Подсказка №2: Следующие директивы имеют недопустимое значение: устаревший-пока-revalidate = 604800 stale-if-error = 604800

https://cdn.polyfill.io/v2/polyfill.min.js

совет № 9: Статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и использовать директиву immutable: max-age = 3600

https: // mc.yandex.ru/metrika/watch.js

hint # 10: Статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и использовать директиву immutable: общедоступный, max-age = 3600, s-maxage = 60

https://static.zdassets.com/ekr/asset_composer.js

совет №11: Статические ресурсы должны иметь длинное значение в кэше (31536000) и использовать директиву immutable: max-age = 315360000

http: // findface.ru / images / press / img_2_active.png

совет № 14: статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и используйте неизменяемую директиву: max-age = 315360000

http://findface.ru/images/press/img_1_active.png

подсказка # 15: Статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и использовать директиву immutable: max-age = 315360000

http: // findface.ru / images / press / img_3_active.png

совет №16: статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и используйте неизменяемую директиву: max-age = 315360000

http://findface.ru/images/press/img_4_active.png

подсказка # 20: Статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и использовать директиву immutable: max-age = 315360000

http: // findface.ru / images / press / img_5_active.png

совет № 21: статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша ( 31536000) и используйте неизменяемую директиву: max-age = 315360000

http://findface.ru/images/press/img_7_active.png

подсказка # 23: Статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и использовать директиву immutable: max-age = 315360000

http: // findface.ru / images / press / img_6_active.png

совет № 29: статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и используйте неизменяемую директиву: max-age = 3600

https://mc.yandex.ru/metrika/advert.gif

подсказка №30: статические ресурсы должны иметь длинное значение кеша (31536000) и использовать директиву immutable: max-age = 315360000

http: // findface.ru / favicon-192×192.png

Как собрать кубик Рубика

Есть много подходов к тому, как собрать кубик Рубика. Все эти методы имеют разный уровень сложности, как для спидкуберов, так и для новичков, даже для решения куба с завязанными глазами. Люди обычно застревают в решении куба после завершения первой грани, после чего им нужна помощь. В следующей статье я покажу вам самый простой способ собрать куб, используя метод для новичков.

Метод, представленный здесь, делит куб на слои, и вы можете решить каждый слой, применяя заданный алгоритм, не нарушая уже существующие части. Вы можете найти отдельную страницу для каждого из семи этапов, если описание на этой странице требует дополнительных пояснений и примеров.

Для начала я рекомендую вам прочитать базовую терминологию кубов, и вам нужно будет знать нотацию кубика Рубика, то есть, что буквы означают в алгоритмах:
F : спереди, R : справа, U : вверх , L : слева, D : вниз.

Чтобы вести учет времени решения, попробуйте онлайн-таймер кубика Рубика с множеством полезных функций или сгенерируйте случайные тасования для своей практики с помощью генератора скремблирования.

Видеоурок

Решение, шаг за шагом

Начнем с белого лица. Сначала мы должны сделать белый крест, обращая внимание на цвет боковых центральных частей. Вы можете попробовать сделать это, не читая инструкции.

Используйте этот этап, чтобы ознакомиться с головоломкой и посмотреть, как далеко вы можете продвинуться без посторонней помощи. Этот шаг относительно интуитивно понятен, потому что здесь нет решаемых частей, на которые нужно обращать внимание. Просто практикуйтесь и не сдавайтесь легко. Попробуйте переместить белые края на свои места, не повредив уже закрепленные.

Здесь вы можете получить небольшую помощь по формированию белого креста с помощью анимированных алгоритмов.

На этом этапе мы должны расположить белые угловые части, чтобы закончить первую грань. Если вы очень настойчивы и вам удалось сделать белый крест без посторонней помощи, вы можете попробовать сделать и этот.Если у вас нет терпения, я дам вам подсказку.

Скрутите нижний слой так, чтобы один из белых углов оказался прямо под местом, где он должен идти на верхнем слое. Теперь выполните один из трех алгоритмов в соответствии с ориентацией изделия, иначе говоря. в каком направлении обращена белая наклейка. Если белый угловой элемент находится на своем месте, но повернут не так, то сначала вам нужно вытащить его.

Подробнее о решении белых углов читайте здесь.

До этого момента процедура была довольно простой, но теперь мы должны использовать алгоритмы. Мы можем забыть законченную белую грань, поэтому давайте перевернем куб, чтобы сосредоточиться на нерешенной стороне.

На этом этапе мы завершаем первые два слоя (F2L). На этом этапе мы должны использовать два симметричных алгоритма. Они называются алгоритмами Right и Left . Эти алгоритмы вставляют верхнюю кромку из верхнего слоя в средний слой, не нарушая при этом решенную белую грань.
Если ни одна из частей верхнего слоя еще не выстроена в линию, как на изображениях ниже, поверните верхний слой до тех пор, пока один из краев верхнего слоя не совпадет с одним из изображений ниже. Затем следуйте алгоритму сопоставления для этой ориентации.

Если кромка находится на своем месте во втором слое, неправильно ориентируясь, то мы должны применить алгоритм дважды. Сначала мы должны вытащить его, вставив на его место другой.

Посмотрите эти алгоритмы F2L в действии по этой ссылке.

Сарт решает последний слой, образуя желтый крест на вершине куба. Не имеет значения, находятся ли части на своих конечных местах, поэтому нам не нужно обращать внимание на цвета сторон.

Сверху мы можем получить три возможных шаблона. Используйте этот алгоритм для перехода из одного состояния в другое:
F R U R ‘U’ F ‘

1. Когда вы видите точку , вам нужно применить алгоритм трижды.Если у вас желтый L-образной формы , то только дважды, держа кубик в руках, как показано на изображении ниже.
2. В случае горизонтальной линии вам просто нужно выполнить перестановку один раз.

Чтобы подробнее узнать о формировании желтого креста на кубике Рубика, щелкните здесь.

Сделав желтый крест на вершине куба, вы должны поставить желтые грани на их конечные места, чтобы они соответствовали цвету боковых центральных частей.Переключите передний и левый желтые края по следующему алгоритму:

Р У Р ‘У Р У2 Р’ У

Вы можете столкнуться с ситуацией, когда вам придется применить этот алгоритм более одного раза.

Необработанными остаются только углы последнего слоя. Сначала мы должны доставить их в нужное место, поэтому не беспокойтесь об ориентации на этом этапе.

Найдите кусок, который уже находится на нужном месте, переместите его в правый передний верхний угол, затем примените следующий алгоритм для переключения (цикла) трех неправильных частей, отмеченных на изображении.

U R U ‘L’ U R ‘U’ L

Сделайте это дважды, чтобы сделать обратное вращение частей. Если ни один из желтых углов не находится в нужном месте, выполните алгоритм один раз, чтобы получить хороший кусок.

Подробнее о перестановке желтых углов последнего слоя можно прочитать здесь.

Все части находятся на своих местах, вам просто нужно сориентировать желтые углы, чтобы закончить головоломку. Это оказалось наиболее запутанным шагом, поэтому внимательно прочтите инструкции и следуйте инструкциям.

Держите куб в руке так, чтобы неразрешенный угол находился в правом верхнем углу, затем выполните описанный ниже алгоритм дважды или четыре раза, пока этот конкретный кусок не будет правильно ориентирован:

R ‘D’ R D

Будет выглядеть так, как будто вы испортили весь куб, но не волнуйтесь, все будет в порядке, когда все угловые части будут ориентированы.

Поверните верхний слой только для того, чтобы переместить еще одну нерешенную желтую часть в передний правый верхний угол куба, и повторите то же самое R ‘D’ R D снова, пока эта конкретная часть не станет в порядке.Будьте осторожны, не перемещайте два нижних слоя между алгоритмами и никогда не вращайте весь куб!

Вы так близки к концу, так что будьте осторожны, потому что именно на этом этапе этого урока большинство людей теряется. Если это описание не имеет смысла, ознакомьтесь с несколькими примерами, щелкнув здесь.

Повторяйте это, пока кубик не будет решен 🙂

Это руководство слишком сложно для вас? Вот что вы можете сделать:

Прочтите другое руководство в учебнике по кубику Рубика или на сайте CubeSolve.com.
Используйте Онлайн-решатель кубика Рубика, вставьте свой скрембл, и программа рассчитает решение за вас.

Комментарии

munga.ru, намек на социальную сеть для сотрудников. / Sudo Null IT News

1) Нет офисного блога, есть доска, где каждый может написать свое мнение, пожелания и предпочтения.
2) Везде появляется блок для голосования, состоящий из точек предполагаемых мест (как добавил автор), поэтому автор реального времени может отслеживать мнение заинтересованных.
3) Вместо вакансий, которые нужно описать, автор описывает предлагаемые места расположения офисов, описывает условия и т. Д.
4) Псевдо-офисы имеют кнопку WIZARD в админке, которая поможет автору быстро и легко превратить псевдо-офис в полноценный проектный офис, как только он определится с местом.

Таким образом, я хотел бы представить заинтересованным людям общую картину коворкинга и, соответственно, дать возможность первого продвижения владельцам офисов. Конечно, на данный момент офису вряд ли понадобится продвижение, но есть офисы, которые больше нигде не представлены. Например, та самая «Лаборатория жизненного творчества», о которой почему-то никто не пишет. Но на самом деле это хорошая альтернатива Москворкингу. По крайней мере, в этом офисе есть душ (с велосипедным багажом!) И прочие ништяки.Несправедливо =)

С чего начать?

В общем буду рад видеть всех в Коворкинг пати на моем проекте или на сопутствующих =)
Огромное спасибо Алексею Глазкову и его банде, kiranoff, DadyUA, indigo и tenzor7 за активно продвигать тему в массы.

Как я научился перестать беспокоиться и полюбить блоки запросов Cosmos DB | Томас Вайс

Этот пост представляет собой перезагрузку моей первоначальной статьи о подготовке блока запросов в DocumentDB. Он был обновлен, чтобы отразить последние изменения, такие как эволюция DocumentDB в Cosmos DB и новые возможности мониторинга.

В качестве платформы «база данных как услуга» Cosmos DB предлагает довольно уникальное преимущество: предсказуемая производительность .Вы указываете ожидаемый уровень пропускной способности, и база данных гарантирует, что она будет соответствовать этому уровню, выделяя необходимые ресурсы для вашего использования.

Единицы запроса – валюта производительности Cosmos DB.

Вы определяете этот уровень производительности, предоставляя для каждого контейнера своей базы данных количество единиц запроса; более точно, вы устанавливаете, сколько единиц запроса вы ожидаете, что контейнер сможет обслуживать в секунду. Предоставленные блоки запросов могут начинаться с малого и масштабироваться до десятков тысяч или даже больше.

Итак, поскольку единицы запроса являются «валютой производительности» в Cosmos DB, вам должно быть любопытно узнать, что они представляют… и здесь, мягко говоря, возникают сложности. Они определяют то, что я бы назвал «работоспособностью». Каждый запрос, который вы отправляете к своему контейнеру – любой запрос: чтение, запись, запросы, выполнение хранимых процедур и т. Д. – имеет соответствующую стоимость, которая будет вычтена из ваших кредитов RU. Таким образом, если вы выделяете 400 RU в секунду и отправляете запрос стоимостью 40 RU, вы сможете отправлять 10 таких запросов в секунду; любой запрос сверх этого будет ограничен.

Искусство оценки потребностей вашей единицы запросов

К настоящему моменту вы, вероятно, догадались, что важно правильно оценить, сколько RU вы должны предоставить; выделение слишком мало, и некоторые из ваших запросов могут завершиться ошибкой, выделение слишком большого количества, и вы будете платить за неиспользованную производительность!

На самом деле довольно сложно выполнить такую ​​оценку с нуля. Microsoft предоставляет некоторые показатели затрат на базовые операции:

• Для документа размером 1 КБ: чтение стоит 1 RU, запись – 5 RU
• Для документа 100 КБ: чтение стоит 10 RU, запись – 50 RU

А еще есть неплохой планировщик емкости, который может помочь угадать целевую пропускную способность на основе образцов документов.

К сожалению, это касается только операций CRUD и не дает ни единого намека на то, сколько RU будут стоить ваши запросы или выполнение хранимых процедур. И это большое дело, потому что, исходя из моего опыта, стоимость этих операций:

• является динамической (стоимость запроса зависит не только от его сложности, но и от количества возвращаемых результатов), а
• может получить довольно высокий (например, десятки RU для запроса, фильтрующего по одному полю).

Короче говоря, довольно сложно предсказать, сколько RU потребуется вашей системе.Так можно ли вообще использовать эту штуку? К счастью, да, это так. Продолжайте читать!

Оцените стоимость типичных запросов с помощью проводника запросов

После того, как вы загрузили в контейнер Cosmos DB некоторые релевантные данные (которые могут быть тестовыми данными для начала), вы можете использовать проводник запросов, доступный на портале Azure . Помимо помощи в построении и отладке ваших SQL-запросов, этот инструмент также сообщает реальную стоимость этих запросов:

Это даст вам представление о фактических расходах, связанных с типичными операциями, которые ваша система должна будет поддерживать.

Cosmos DB интеллектуально регулирует ваши запросы

Когда вы превышаете квоту RU, Cosmos DB не отклоняет ваши дополнительные запросы, просто крича ERROR ! Он не только явно помечает эти дросселированные запросы кодом состояния HTTP 429, но и предоставляет очень полезный заголовок: x-ms-retry-after-ms . Как следует из названия, этот заголовок сообщает вам, сколько времени вам следует подождать перед повторной попыткой.

Хотя эта подсказка имеет свои собственные ограничения (она может быть не очень надежной, если несколько клиентов одновременно перегружают вашу квоту RU), это все же очень полезная информация, которую нужно иметь, чтобы определить период охлаждения, который следует подождать и Избегайте слишком агрессивной политики повторных попыток (что еще больше ухудшит ситуацию!).

Официальные SDK Microsoft делают работу за вас

Хорошая новость в том, что если вы используете один из официальных SDK Microsoft Cosmos DB (в настоящее время доступен для .NET / .NET Core, Java, Node.js и Python), они все реализуют логику повтора, основанную на упомянутом выше заголовке, и применяют ее по умолчанию. И по умолчанию все они повторяют дросселированные запросы до 9 раз или до 60 секунд после того, как запрос был первоначально отправлен, в зависимости от того, что наступит раньше. Эти параметры можно настроить при создании нового экземпляра DocumentClient.

Регулирование запросов можно легко отслеживать

С портала Azure легко отслеживать количество регулируемых запросов, а также количество израсходованных RU по сравнению с тем, сколько вы подготовили.

Еще лучше, вы можете (и должны!) Установить предупреждения, когда количество регулируемых запросов превышает определенный порог:

Эти предупреждения могут отправлять электронное письмо администраторам учетных записей или вызывать настраиваемый веб-перехватчик HTTP.

Гибкое масштабирование пропускной способности и по требованию

Мониторинг потребления RU и соотношения регулируемых запросов, вероятно, покажет, что вам не нужно поддерживать постоянный уровень производительности в течение дня или недели; многие веб-приложения получают меньше трафика ночью или в выходные дни.

API REST Cosmos DB предоставляет конечные точки для программного обновления уровня производительности ваших контейнеров (эти конечные точки также доступны через официальные пакеты SDK), что упрощает регулировку пропускной способности вашего кода в зависимости от времени суток или дня недели. неделя.Операция выполняется без простоев и обычно вступает в силу менее чем через минуту.

Cosmos DB не предлагает автоматическое масштабирование производительности (пока – я бы не удивился, если бы это было в разработке), но вполне возможно реализовать нечто подобное: вы можете собирать живые метрики либо из кода вашего приложения, либо с помощью Мониторинг веб-перехватчиков Azure, агрегирование этих данных в Azure Stream Analytics и использование выходных данных в некоторых функциях Azure для корректировки в реальном времени подготовки пропускной способности.Что ж, думаю, я только что нашел хорошую тему для следующего сообщения в блоге!

Путь к оптимальному использованию Cosmos DB

Рабочий процесс, который я обычно рекомендую для настройки единиц запроса в новом проекте:

1. Выполните первоначальную приблизительную оценку с помощью планировщика емкости и скорректируйте свою оценку с помощью запроса explorer
2. Если возможно, используйте один из официальных пакетов SDK Cosmos DB, чтобы воспользоваться автоматическими повторными попытками при регулировании запросов – если вы работаете на платформе, которая не поддерживается, и используете REST API Cosmos DB, реализуйте собственную политику повторных попыток с помощью x-ms-retry-after-ms header
3. Очевидно, убедитесь, что код вашего приложения изящно поддерживает случай, когда все попытки завершаются неудачно. последние 15 минут и переключитесь на более разрешительные правила, как только вы определите свое фактическое потребление (помните, что периодические дросселирования – это нормально, они показывают, что вы платите с установленными вами ограничениями, и это именно то, что вы хотите делать)
4. Используйте мониторинг, чтобы понять структуру вашего трафика, чтобы вы могли учитывать необходимость динамической корректировки выделения пропускной способности в течение дня / недели
5. Регулярно отслеживайте выделенную пропускную способность против.коэффициент потребленных единиц RU, чтобы убедиться, что вы не избыточно подготовили свои контейнеры

Я надеюсь, что выполнение этих шагов поможет вам эффективно и уверенно использовать Cosmos DB!

Загробная жизнь // Подсказка на AG.ru

Подсказки к игре: (Не жульничество)

1) Стройте медленно, сначала стройте 1 самолет, * НЕ * и то и другое. Не волнуйтесь, как только вы заработали
, построить на другом уровне совсем несложно.
душ просто вливаются в

2) Создайте зону судьбы 3×3, когда появится шип.И если появятся новые шипы
, подождите несколько лет, чтобы структуры судьбы обновили себя
, таким образом удерживая больше душ. (Я полностью построил 1 план, когда обнаружил
, что построил неэффективные зоны судьбы, например 1 квадрат или 2
квадратов: o ()

3) Когда вы начнете, вы потеряете деньги, но это улучшится, если вы начнете медленно.

4) Я заметил, что тренировочные центры не будут тренировать души, если вы
шлепаете его в игре слишком рано. Так что вставьте его, когда вы думаете, что ваши души
готовы к обучению, тем самым сэкономив копейки от импорта еще
демонов для управления неактивным центром.

5) Rocks / Ad Infinitum – Нет ограничений / правил для размещения Ad
Infinitum. Вы можете разместить более 1 Ad Infinitum вокруг 1 камня, и это
все равно увеличит заряды для ваших построек.

6) Дороги: чем меньше, тем лучше. Попробуйте следующее: добавьте больше дорог, затем
проверьте свои годовые расходы на дороги. УРА !! : o (. Таким образом, меньше дороги = меньше
проблема / затор = меньше потраченных пенни: o) (Хотя Джаспер будет постоянно просить вас управлять дорогами, но я обычно игнорирую его.Привет! Я
дьяволу не доверяю!)

7) KStations: Стройте их подальше от ваших построек !! Они испускают
сильные нежелательные флюиды !!

8) Врата: Старайтесь не ставить их посреди ваших построек, противные флюиды
! Но это банально, как только вы получите подарочную конструкцию, просто положите ее
возле ворот. но не забудьте оставить для них немного места! : o)

9) Вон-хой! [Всегда хотел это сказать! : o)]

10) Балансировка структур судьбы: * ОЧЕНЬ * Важно! Лучший способ сделать
таким дешевым способом – это, если вы следовали правилу сборки 3×3.
было бы намного проще. (Не так плохо, как балансировка 1 квадрата неэффективных зон
) просто подождите некоторое время, пока ваши структуры не увеличатся до 2×2 или 3×3.
Затем выключите вид структуры, таким образом показывая структуры в квадратах
. С этого момента все довольно просто. О, чтобы вручную сбалансировать
для повышения эффективности, сдвиньте ползунок до тех пор, пока полоса под ним
не станет белой. Если вы ленивы или у вас мало времени, потому что вы
играете в эту игру на своем офисном компьютере (хе-хе, мы все
знаем, что это значит!), Вы можете использовать функцию автоматического баланса, но это
очень дорого.(По крайней мере, вы меньше рискуете попасться
за игрой в офисе, что действительно обойдется вам дорого!: OP)

11) Подарочные структуры – об этом особо нечего говорить, это просто дает
много сильных желаемых вибраций. Не нужны дороги, Ad Infinitum, ничего.
Просто положите туда, где больше всего нужно. Вот уровень популяции для
каждой отдельной структуры подарков:
50K – Улучшение Vista Doohicky / The Ugliness Engine
500K – Эмбофон с улучшенным звуком / Crinkly Cacophony Contrivance
5M-The Heaven Scent Atomizer / The Flabbergasting Flatulence Ol-Factory
50M – Замок Creame Candy / Источник неприязни
500M – Floofy Comfort Dispenser / The Tactile Degradation Gizmo
ПРИМЕЧАНИЕ: Вам нужно достичь этой численности для каждого плана, * НЕ * всего
населения на обоих планах! : o (
Откуда взялось такое название ?? !! Во всяком случае, эти сооружения
можно построить только один раз.Они ничего не стоят. Даже если вы уничтожите его,
он снова будет доступен в вашем меню.

12) Как вы думаете, ваш горячий ?? !! Тогда стремитесь к 1 миллиарду населения на
самолет. На этом этапе вы можете построить купола любви / омниболжи. После того, как вы построите
эти сооружения, вы сможете уничтожить большинство своих строений судьбы и
наверстать упущенное во сне, так как вы купили эту игру.

13) Следите за своими тренировочными центрами !! Когда у вас есть лишняя рабочая сила, им
бывает скучно.Поскольку в
Heaven / Hell нет торговых центров, театров или телевизоров, они начнут искать «развлечения» на другом плане! На другом самолете
взрывают строения! (Хотя
все еще неизвестно, где они купили взрывчатку) Вы услышите “Charge” и взрывы
зданий, если у вас включены звуки.

14) Плохие штучки – я не слишком уверен в этом, но я думаю, что если вы
выключите его, это просто сократит ваши гроши / душу на половину. Да и вообще максимум
за копейки / душу всего 10.00 копеек. Если было настроено плохое.
Иначе, если он был выключен, максимум всего 5,00 копеек / душу.

15) Порты – Если вы не знаете, как это работает, я предлагаю вам взять такси
к одному и оставаться там, пока вы не разберетесь. Ну, в любом случае, для
тех, кто не может позволить себе проезд на такси, вот некоторая информация. Постройте
портов по обе стороны реки, соедините дороги от порта к строениям,
и вот оно.

16) Банки – Большое нет-нет! Ставит вас в худшее положение, чем когда вы начинаете
.Но если вы должны построить их на небесах, их условия оплаты
лучше.

17) Топиас, если вы можете себе позволить перейти на лучшие Топиас, сделайте это.
Потому что одна из них может вместить много рабочих, что позволяет сэкономить место для
других строений. Кроме того, лучший Topias влияет на более широкую область с точки зрения
вибрации.

18) При строительстве более дешевых ворот в начале игры, знайте,
, что лучшие ворота нуждаются в квадрате 4×4! Таким образом, модернизация означает уничтожение
некоторых построек, что, на мой взгляд, было круто: o)

19) Прочтите информацию о структуре, особенно о подарочных структурах.
Обычно это заставляет вас смеяться и забывать, что вам нужно спать.

20) Лимбос – Лично не используйте его часто, потому что:
a) Это сбивает с толку, цвет, показанный в контейнере, не тот цвет
, из которого вам нужно строить больше.
б) Становится дорогой привычкой, потому что она взрывается при заполнении, поэтому
требуется еще одна.
в) Мне не нравится пиво, сваренное мертвыми людьми.

21) Управление планетой – это в основном контроль над живыми. Вам не нужно по-настоящему дурачиться, если у вас нет много времени и
пенни в ваших руках.Вы пытаетесь повлиять на них, так называемые EMBO, чтобы
приходили в ваши заведения: o) В любом случае, поскольку это тривиально, я не буду много говорить об этом.

22) Более быстрая игра – Отключите все, структуры, сетки, звук.
и т. Д. Работает намного быстрее, если вы хотите получить эти гроши быстрее.

23) Вот здесь и тусуется Элвис !! (Disco Inferno)

24) Трахнись! Простите, просто не удержался.

В любом случае, я думаю, что это касается большей части материала.Пожалуйста, обратите внимание на
, что эта информация написана на основе моего опыта во время игры, а
не из других источников. Так что, если вы вытащите все свои волосы, играя в эту игру
с этим маленьким руководством, пожалуйста, не обвиняйте меня. О, еще одна вещь
, пожалуйста, добавьте любую информацию, которая у вас есть, или исправьте их, если они
неверны. Спасибо

BTW. Я опубликую о том, как редактировать файлы по шестнадцатеричной системе, если кто-то этого захочет: o).
Ahhhh Наконец-то! Я могу снова заснуть! ЗЕВАТЬ!

– = STaSiS = –

FastAPI

Фреймворк FastAPI, высокая производительность, простой в освоении, быстрый код, готовый к производству

Документация : https: // fastapi.tiangolo.com

Исходный код : https://github.com/tiangolo/fastapi

FastAPI – это современный, быстрый (высокопроизводительный) веб-фреймворк для создания API-интерфейсов с Python 3.6+ на основе стандартных подсказок типа Python.

Ключевые особенности:

• Fast : Очень высокая производительность, на уровне NodeJS и Go (спасибо Starlette и Pydantic). Один из самых быстрых доступных фреймворков Python.

• Быстрый код : Увеличьте скорость разработки функций примерно на 200–300%.*

• Меньше ошибок : Уменьшение примерно на 40% ошибок, вызванных человеком (разработчиком). *
• Интуитивно понятный : Отличная поддержка редактора. Доработка везде. Меньше времени на отладку.
• Easy : Разработан, чтобы быть простым в использовании и обучении. Меньше времени на чтение документов.
• Короткий : минимизация дублирования кода. Несколько функций из каждого объявления параметра. Меньше ошибок.
• Robust : получите готовый к работе код.С автоматической интерактивной документацией.
• На основе стандартов : Основан на открытых стандартах API (и полностью совместим с ними): OpenAPI (ранее известный как Swagger) и JSON Schema.

* оценка основана на тестах внутренней группы разработчиков, создающих производственные приложения.

Другие спонсоры

Отзывы

“ […] Я использую FastAPI тонну в наши дни. […] Я действительно планирую использовать его для всех служб ML моей команды в Microsoft .Некоторые из них интегрируются в основной продукт Windows и некоторые продукты Office . “

“ Мы адаптировали библиотеку FastAPI для создания сервера REST , который можно запрашивать для получения прогнозов . [Для Людвига] ”

“ Netflix рада объявить о выпуске с открытым исходным кодом нашей платформы управления кризисом оркестровки: Dispatch ! [Построено с FastAPI ] ”

“ Я нахожусь на седьмом небе от счастья по поводу FastAPI .Это так весело! “

“ Честно говоря, то, что вы построили, выглядит супер прочным и отполированным. Во многих смыслах это то, что я хотел, чтобы Hug был таким – это действительно вдохновляет видеть, как кто-то это построит. ”

“ Если вы хотите изучить одну современную структуру для создания REST API, ознакомьтесь с FastAPI […] Это быстро, легко и просто в использовании […] ”

“ Мы перешли на FastAPI для наших API […] Думаю, вам понравится […] “

Если вы создаете приложение CLI , которое будет использоваться в терминале вместо веб-API, ознакомьтесь с Typer .

Typer – младший брат FastAPI. И это должен быть FastAPI для интерфейсов командной строки . ⌨️ 🚀

Требования

Python 3.6+

FastAPI стоит на плечах гигантов:

Установка

  $ pip install fastapi

---> 100%
  

Вам также понадобится сервер ASGI для производства, такого как Uvicorn или Hypercorn.

  $ pip install uvicorn [стандарт]

---> 100%
  

Пример

Создай

• Создайте файл main.py с:

  от ввода импорта Необязательно

из fastapi импорт FastAPI

app = FastAPI ()


@ app.get ("/")
def read_root ():
    return {"Привет": "Мир"}


@ app.get ("/ items / {item_id}")
def read_item (item_id: int, q: Необязательно [str] = None):
    return {"item_id": item_id, "q": q}
  

Или используйте async def …

Если ваш код использует async / await , используйте async def :

  от ввода импорта Необязательно

из fastapi импорт FastAPI

app = FastAPI ()


@ app.get ("/")
async def read_root ():
    return {"Привет": "Мир"}


@ app.get ("/ items / {item_id}")
async def read_item (item_id: int, q: Необязательно [str] = None):
    return {"item_id": item_id, "q": q}
  

Примечание :

Если вы не знаете, проверьте “Спешите?” о async и ожидают в документах.

Беги

Запустите сервер с:

  $ uvicorn main: app --reload

ИНФОРМАЦИЯ: Uvicorn работает на http://127.0.0.1:8000 (нажмите CTRL + C, чтобы выйти)
ИНФОРМАЦИЯ: начат процесс перезагрузки [28720]
ИНФОРМАЦИЯ: запущен серверный процесс [28722]
ИНФОРМАЦИЯ: Ожидание запуска приложения.
ИНФОРМАЦИЯ: запуск приложения завершен.
  

О команде uvicorn main: app --reload …

Команда uvicorn main: app относится к:

• main : файл main.py («модуль» Python).
• app : объект, созданный внутри main.py со строкой app = FastAPI () .
• --reload : перезагрузить сервер после изменения кода. Делайте это только для развития.

Проверь

Откройте свой браузер по адресу http://127.0.0.1:8000/items/5?q=somequery.

Вы увидите ответ JSON как:

  {"item_id": 5, "q": "somequery"}
  

Вы уже создали API, который:

• Получает HTTP-запросы по путям / и / items / {item_id} .
• Оба пути принимают GET операции (также известные как HTTP методы ).
• Путь / items / {item_id} имеет параметр пути item_id , который должен быть int .
• Путь / items / {item_id} имеет необязательный параметр запроса str q .

Интерактивные документы API

Теперь перейдите по адресу http: // 127.0.0.1: 8000 / док.

Вы увидите автоматическую интерактивную документацию по API (предоставляется Swagger UI):

Альтернативные документы API

А теперь перейдите на http://127.0.0.1:8000/redoc.

Вы увидите альтернативную автоматическую документацию (предоставленную ReDoc):

Пример обновления

Теперь измените файл main.py , чтобы получить тело из запроса PUT .

Объявите тело, используя стандартные типы Python, благодаря Pydantic.

  от ввода импорта Необязательно

из fastapi импорт FastAPI
из pydantic import BaseModel

app = FastAPI ()


класс Item (BaseModel):
    имя: ул.
    цена: float
    is_offer: Необязательно [bool] = Нет


@ app.get ("/")
def read_root ():
    return {"Привет": "Мир"}


@ app.get ("/ items / {item_id}")
def read_item (item_id: int, q: Необязательно [str] = None):
    return {"item_id": item_id, "q": q}


@ app.put ("/ items / {item_id}")
def update_item (item_id: int, item: Item):
    return {"item_name": item.name, "item_id": item_id}
  

Сервер должен перезагрузиться автоматически (потому что вы добавили --reload в команду uvicorn выше).

Обновление интерактивной документации API

Теперь перейдите по адресу http://127.0.0.1:8000/docs.

• Интерактивная документация API будет обновлена ​​автоматически, включая новое тело:

• Нажмите кнопку «Попробовать», это позволяет вам заполнить параметры и напрямую взаимодействовать с API:

• Затем нажмите кнопку «Выполнить», пользовательский интерфейс свяжется с вашим API, отправит параметры, получит результаты и отобразит их на экране:

Альтернативное обновление документации API

А теперь перейдите по адресу http: // 127.0.0.1: 8000 / редок.

• Альтернативная документация также будет отражать новый параметр и тело запроса:

Резюме

Таким образом, вы объявляете один раз, типы параметров, тела и т. Д. Как параметры функции.

Вы делаете это со стандартными современными типами Python.

Вам не нужно изучать новый синтаксис, методы или классы конкретной библиотеки и т. Д.

Просто стандартный Python 3.6+ .

Например, для int :

или для более сложного Позиция модель:

…и с этим единственным объявлением вы получите:

Поддержка редактора
• , в том числе:
• Проверка данных:
  • Автоматическое устранение ошибок и устранение ошибок, если данные недействительны.
  • Проверка даже для глубоко вложенных объектов JSON.
• Преобразование входных данных: поступающих из сети в данные и типы Python. Чтение из:
  • JSON.
  • Параметры пути.
  • Параметры запроса.
  • файлов cookie.
  • Заголовки.
  • форм.
  • файлов.
• Преобразование выходных данных: преобразование данных и типов Python в сетевые данные (как JSON):
  • Преобразование типов Python ( str , int , float , bool , list и т. Д.) .
  • datetime объектов.
  • UUID объектов.
  • Базы данных моделей.
  • … и многое другое.
• Автоматическая интерактивная документация API, включая 2 альтернативных пользовательских интерфейса:

Возвращаясь к предыдущему примеру кода, FastAPI будет:

• Убедитесь, что существует item_id в пути для запросов GET и PUT .
• Убедитесь, что item_id имеет тип int для запросов GET и PUT .
  • Если это не так, клиент увидит полезную явную ошибку.
• Проверьте, есть ли необязательный параметр запроса с именем q (например, http://127.0.0.1:8000/items/foo?q=somequery ) для запросов GET .
  • Поскольку параметр q объявлен с = None , он является необязательным.
  • Без Нет он потребовался бы (как и корпус в случае с PUT ).
• Для PUT запросов к / items / {item_id} , прочтите тело как JSON:
  • Убедитесь, что у него есть обязательный атрибут name , который должен быть str .
  • Убедитесь, что у него есть обязательный атрибут цена , который должен быть с плавающей запятой .
  • Убедитесь, что у него есть необязательный атрибут is_offer , который должен быть bool , если он присутствует.
  • Все это также будет работать для глубоко вложенных объектов JSON.
• Автоматическое преобразование из и в JSON.
• Документируйте все с помощью OpenAPI, которое может использоваться:
  • Интерактивными системами документации.
  • Системы автоматической генерации клиентского кода для многих языков.
• Обеспечивает 2 интерактивных веб-интерфейса документации напрямую.

Мы только поцарапали поверхность, но вы уже понимаете, как все это работает.

Попробуйте изменить строку с помощью:

  return {"item_name": item.name, "item_id": item_id}
  

… с:

  ... "item_name": item.name ...
  

… к:

  ... "item_price": item.price ...
  

… и посмотрите, как ваш редактор автоматически заполнит атрибуты и узнает их типы:

Для более полного примера, включающего больше функций, см. Учебное пособие – Руководство пользователя.

Спойлер : учебное пособие – руководство пользователя включает:

• Объявление параметров из других разных мест как: заголовки , , файлы cookie , , поля формы и файлы .
• Как установить ограничения проверки как maximum_length или regex .
• Очень мощная и простая в использовании система Dependency Injection .
• Безопасность и аутентификация, включая поддержку OAuth3 с токенами JWT и HTTP Basic auth.
• Более продвинутые (но столь же простые) методы объявления глубоко вложенных моделей JSON (благодаря Pydantic).
• Множество дополнительных функций (спасибо Starlette), например:
  • WebSockets
  • GraphQL
  • чрезвычайно простые тесты на основе запросов и pytest
  • CORS
  • Сеансы файлов cookie
  • … и многое другое.

Производительность

Независимые тесты TechEmpower показывают, что приложения FastAPI , работающие под Uvicorn, являются одними из самых быстрых доступных фреймворков Python, уступая только Starlette и Uvicorn (используемым внутри FastAPI).(*)

Чтобы узнать больше об этом, см. Раздел Тесты.

Необязательные зависимости

Используется Pydantic:

Используется Старлетт:

• запросов – Требуется, если вы хотите использовать TestClient .
• aiofiles – требуется, если вы хотите использовать FileResponse или StaticFiles .
• jinja2 – Требуется, если вы хотите использовать конфигурацию шаблона по умолчанию.
• python-multipart – Требуется, если вы хотите поддерживать «синтаксический анализ» формы с request.form () .
• itsdangerous – Требуется для поддержки SessionMiddleware .
• pyyaml ​​ – Требуется для поддержки Starlette SchemaGenerator (вероятно, он вам не понадобится с FastAPI).
• графен – требуется для поддержки GraphQLApp .
• ujson – требуется, если вы хотите использовать UJSONResponse .

Используется FastAPI / Starlette:

• uvicorn – для сервера, который загружает и обслуживает ваше приложение.
• orjson – требуется, если вы хотите использовать ORJSONResponse .

Вы можете установить все это с помощью команды pip install fastapi [all] .

Лицензия

Этот проект находится под лицензией MIT.

Самособирающийся Ru – Pt металлический слой в качестве фотосенсибилизатора, нацеленного на лизосомы для 2-фотонной фотодинамической терапии

Фотодинамическая терапия (ФДТ) – это метод лечения, который функционирует за счет комбинации нетоксичного фотосенсибилизатора (PS), света и молекулярного кислорода. (1⇓ – 3).Облученный светом соответствующей длины волны, PS возбуждается и вызывает межмолекулярный триплет-триплетный перенос энергии к кислороду, который генерирует активные формы кислорода (ROS) (1⇓ – 3). Эти АФК вызывают гибель клеток через пути апоптоза и / или некроза, повреждение сосудистой сети и острые воспалительные реакции, что приводит к прогрессирующей регрессии заболевания (4, 5). Локализуя как PS, так и воздействие света в злокачественной ткани, PDT может избирательно убивать злокачественные клетки, сводя к минимуму побочные повреждения здоровой ткани.Благодаря своему уникальному механизму ФДТ является эффективной альтернативой традиционным методам лечения различных типов рака, инфекций и кожных заболеваний (1–3). Чтобы повысить эффективность ФДТ, были предприняты большие усилия по оптимизации фотофизических и биологических свойств ФС (6–12).

Длина волны света является определяющим фактором глубины его проникновения. ФС с длинами волн возбуждения в биологическом оптическом окне (600-900 нм), где глубина проникновения света наибольшая, весьма желательны для клинического использования (13).Двухфотонная PDT, в которой PS активируется двумя фотонами, а не одним фотоном высокой энергии, была предложена в качестве метода регулировки длины волны возбуждения в соответствии с биологическим оптическим окном (14, 15). Кроме того, двухфотонная ФДТ также улучшает пространственную избирательность и снижает фотоповреждение здоровых тканей (15, 16). Эффективность 2-фотонного поглощения света, также известная как сечение 2-фотонного поглощения, имеет решающее значение для терапевтической эффективности PS (15, 17–19). Однако применимость существующих клинических PS для 2-фотонной ФДТ in vivo затруднена из-за их низких поперечных сечений 2-фотонного поглощения: порядка от 1 до 100 единиц Goeppert Mayer (GM) (1 GM = 10 ⁻⁵⁰ см ⁴ с фотон ⁻¹ ) (20⇓ – 22).

Терапевтическая эффективность PDT может быть улучшена, если PS демонстрирует избирательное накопление в субклеточных компартментах, которые чувствительны к повреждению, вызванному ROS, из-за малого радиуса действия ROS в биологических системах (23–26). Более того, PSs, которые селективно локализуются в субклеточных компартментах, менее склонны к оттоку по сравнению с PS, которые беспорядочно диффундируют в цитоплазму (26–28). Лизосомы становятся новой мишенью для ФДТ из-за их тесной связи с апоптозом и некрозом (29, 30).Было обнаружено, что фотоповреждение лизосом более эффективно вызывает гибель клеток по сравнению с другими органеллами (31), а локализация в лизосомах может минимизировать взаимодействие между PS и другими клеточными компартментами, предотвращая высокую темновую цитотоксичность (32, 33). Таким образом, локализованные в лизосомах PS очень перспективны для высокоэффективной и точной 2-фотонной PDT.

Самосборка, управляемая координацией, которая основана на спонтанной организации льюисовских кислотных металлсодержащих акцепторных строительных блоков и льюисовских основных органических донорных строительных блоков через координационные взаимодействия, представляет собой модульный подход к синтезу дискретных супрамолекулярных координационных комплексов ( SCC) с высокой структурной и функциональной сложностью (34⇓⇓ – 37).Путем разумного выбора молекулярных строительных блоков формы, геометрия и биологические свойства SCC могут быть точно изменены, чтобы способствовать биомедицинским применениям, таким как противораковая активность (38⇓⇓⇓ – 42), доставка лекарств (43⇓⇓ – 46 ), биоимиджинг (47, 48) и биораспознавание (49–51). Самоорганизованные металлоциклы показали потенциал в качестве фотосенсибилизаторов для катализа, а также в качестве ФДТ для лечения рака и бактериальной инактивации (39, 40, 52–54). Мы предполагали, что SCC с высоким уровнем структурной сложности, такие как металлические покрытия, могут обеспечить благоприятные фотофизические и биологические свойства по сравнению со своими 2D-аналогами из-за их трехмерной структуры и большого количества функциональных фрагментов в одном ансамбле.Здесь мы описываем использование управляемой координацией самосборки для приготовления биметаллического металлического покрытия Ru – Pt в качестве PS для 2-фотонной PDT. Комплексы Ru (II) привлекают большое внимание в качестве ФС для ФДТ из-за их богатых фотохимических и фотофизических свойств (7, 55–57). Объединив 6 ПС на основе Ru (II) и 4 акцепторных строительных блока на основе Pt (II) в единый супрамолекулярный ансамбль, октаэдрический металлический каркас Ru-Pt был синтезирован с использованием координационно-управляемой самосборки и демонстрирует темно-красное излучение, большое Сечение двухфотонного поглощения и высокая эффективность генерации АФК при активации двухфотонным световым излучением.Наночастицы, образованные в результате инкапсуляции металлической оболочки амфифильным полимером, избирательно накапливаются в лизосомах. Благодаря этим благоприятным характеристикам высокоэффективная двухфотонная ФДТ, опосредованная металлической оболочкой, была достигнута в однослойных клетках и трехмерных многоклеточных сфероидах. Значительная противоопухолевая эффективность 2-фотонной ФДТ с использованием металлических наночастиц была дополнительно продемонстрирована исследованиями in vivo на мышах с опухолью A549. Это исследование показывает, что управляемая координацией самосборка обеспечивает универсальную стратегию развития PS с фотофизическими и биологическими свойствами, предназначенных для эффективной PDT.

Результаты и обсуждение

Синтез SCC.

Ru (bpy) ₃ ²⁺ (bpy = 2,2′-бипиридин) и его производные широко используются не только в ФДТ (7, 56, 58⇓ – 60), но и в фотоокислительном катализе (61 ) и фотоэлектрические (62). Дитопный Ru (II) -содержащий донор 1 был получен заменой 1 bpy группы Ru (bpy) ₃ ²⁺ на 4,4 ′: 2 ′, 2 ″: 4 ″, 4 ″ ′ -кватерпиридин. Основываясь на принципах самосборки, управляемой координацией, геометрия SCC определяется длиной и углами донорных и акцепторных строительных блоков (63).Комбинация 1 с акцептором ди-Pt (II) 2 или акцептором три-Pt (II) 3 в CH ₂ Cl ₂ / CH ₃ OH ( v : v = 1: 1) приводит к образованию [2 + 2] ромбовидного металлоцикла 4 или [6 + 4] октаэдрического металлопластика 5 (рис. 1 A ). Спектры ЯМР ³¹ P как 4 , так и 5 показали резкие синглеты с сопутствующими сателлитами ¹⁹⁵ Pt (δ ​​= 13.62 и 13,32 частей на миллион для 4 и 5 , соответственно) (рис. 1 B и C ), что указывает на образование дискретного одиночного продукта с высокой симметрией при самосборке. Образование единичных видов также подтверждается экспериментами ЯМР с диффузионно-упорядоченной спектроскопией ¹ H со значениями коэффициента диффузии 7,7 × 10 ⁻¹¹ м ² мкс ⁻¹ и 6,9 × 10 ⁻¹¹ м. ² ⋅s ⁻¹ для 4 и 5 соответственно ( SI Приложение , рис.S2 и S5). Затем составы 4 и 5 были определены с использованием времяпролетной масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением (ESI-TOF-MS). В спектре ESI-TOF-MS 4 присутствовали пики с m / z значениями 917,26, 721,59 и 591,15, которые могли быть отнесены к сборке [2 + 2] с +4, +5 и +6 зарядов из-за прогрессирующей потери нитрат-анионов (Рис. 1 D и SI Приложение , Рис. S3). Аналогичным образом, серия пиков, соответствующих сборке [6 + 4] с зарядом от +7 до +14, наблюдалась для спектра ESI-TOF-MS 5 (рис.1 E и SI Приложение , Рис. S6). Распределение изотопов экспериментальных спектров также близко соответствовало моделированным спектрам, что подтверждает предложенную стехиометрию для 4 и 5 .

Самостоятельная сборка и определение характеристик SCC. ( A ) Самостоятельная сборка [2 + 2] для получения 4 и [6 + 4] самостоятельная сборка для получения 5 . ( B и C ) ³¹ P { ¹ H} Спектры ЯМР 4 ( B ) и 5 ( C ).( D – E ) ESI-TOF-MS спектры 4 ( D ) и 5 ( E ).

Фотофизические свойства и образование АФК SCC.

Стационарные фотофизические профили SCC обобщены в SI Приложение , Таблица S1. Донор 1 показал полосу поглощения с переносом заряда от металла к лиганду (MLCT) с центром при 468 нм ( SI Приложение , рис. S7). SCC продемонстрировали характеристики поглощения, аналогичные характеристикам поглощения 1 , но 4 и 5 имели красные смещенные полосы MLCT при 482 и 481 нм, соответственно ( SI Приложение , рис.S7). При возбуждении перехода MLCT как 4 , так и 5 демонстрируют неструктурированную красную полосу излучения с центрами 672 и 673 нм соответственно, которая смещена на ∼30 нм относительно 1 (рис. 2 A ) . Длительное время жизни излучения (> 400 нс) и повышенный квантовый выход в атмосфере аргона указывают на то, что излучение может иметь фосфоресцентную природу. Красное смещение поглощения, излучения и большого стоксова сдвига (190 нм) SCC способствовало дальнейшим биологическим исследованиям.

Фотофизические свойства и образование АФК соединений. ( A ) Спектр люминесцентного излучения соединений. ( B ) Сечения двухфотонного поглощения соединений при различных длинах волн возбуждения от 780 до 930 нм. Измерение эффективности производства ¹ O ₂ по изменению оптической плотности DPBF при 411 нм в зависимости от времени облучения (λ _irr = 450 нм) в присутствии соединений в отрегулированных концентрациях.[Ru (bpy) ₃ ] ²⁺ использовали в качестве стандарта. ( Врезка ) Спектры излучения смеси 5 и DPBF при облучении.

Двухфотонные поперечные сечения SCC от 780 до 920 нм были измерены с использованием метода флуоресценции с двухфотонным возбуждением (64) и сравнивались с 1 (рис. 2 B ). Оба SCC показали наибольшее двухфотонное поглощение на длине волны 820 нм, со значениями 1969 GM для металлацикла 4 и 5468 GM для металлического покрытия 5 , тогда как предшественник 1 показал 2-фотонное поперечное сечение 161 GM ниже. такие же условия.Значительное повышение эффективности поглощения 2-фотонов, наблюдаемое для SCC, объясняется организацией множества комплексов Ru (II) в единую супрамолекулярную систему посредством самосборки и усиленной поляризацией заряда мотива Ru (II), индуцированной жесткая конструкция SCC (22, 65, 66). Спектры излучения соединений 1 , 4 и 5 при возбуждении на длине волны 820 нм ( SI Приложение , рис. S8) аналогичны их линейным спектрам излучения, а их интенсивности излучения показывают квадратичную зависимость от мощности возбуждения. , подтверждая, что соединения являются 2-фотонно-активными.

Синглетный кислород ( ¹ O ₂ ) является основным АФК, генерируемым ФС на основе Ru (II) (7, 55⇓ – 57). Квантовые выходы ¹ O ₂ (Φ _▵ ) 1 , 4 и 5 были непосредственно определены путем оценки люминесценции ¹ O ₂ при 1270 нм при фотовозбуждении соединения ( SI Приложение , рис. S9 B ). Раствор Ru (bpy ₃ ) ²⁺ использовали в качестве эталонного сенсибилизатора (Φ = 81.0%). Это привело к значениям Φ _▵ , равным 63,3, 75,3 и 85,0% для 1 , 4 и 5 соответственно. Косвенное измерение для Φ было также выполнено путем мониторинга индуцированного PS разложения 1,3-дифенилизобензофурана (DPBF) с зеленым излучением, что дало сопоставимые значения (Φ 62,9, 76,7 и 86,2% для 1). , 4 и 5 соответственно, рис.2 C ). Высокое поперечное сечение для 2-фотонов и Φ для SCC, особенно для металлического покрытия 5 , указывают на их большой потенциал как эффективных сенсибилизаторов для 2-фотонной PDT.

Изготовление, клеточное поглощение и локализация наночастиц, нагруженных SCC.

Metallacycle 4 проявлял благоприятные клеточные свойства и накапливался в митохондриях ( SI Приложение , Рис. S11), тогда как Metallacage 5 показал плохое клеточное поглощение из-за его ограниченной растворимости в водном растворе ( SI Приложение , Рис. S12). Чтобы реализовать его применение в физиологических условиях и повысить его биосовместимость и биодоступность, Metallacage 5 был инкапсулирован с использованием DSPE-mPEG2000 в качестве матрицы.Содержание загрузки 5 в наночастицах было определено как 17,6% ( SI Приложение , раздел 4.1). Формирование металлических наночастиц 5, нагруженных ( 5-НЧ ) напрямую подтверждается наблюдением сферических мицеллярных наноструктур диаметром около 230 нм на изображениях просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) (рис. 3 B ). Измерение динамического светорассеяния (ДРС) на растворе 5-НЧ показало средний размер 260 нм (рис.3 C ), что согласуется с результатами ПЭМ. Стабильность 5-NPs в сыворотке, содержащей среду для культивирования клеток, исследовали путем отслеживания профиля излучения люминесценции смеси ( SI Приложение , фиг. S10). Никакого видимого разложения не наблюдалось через 24 часа, что позволяет предположить, что 5-НЧ обладают хорошей стабильностью для биомедицинских применений.

Изготовление 5-НЧ и их клеточное распределение. ( A ) Схематическое изображение изготовления 5-NP, , клеточного поглощения, накопления в лизосомах и их применения в 2-фотонной ФДТ.( B ) ПЭМ-изображение 5-НЧ . ( C ) Результат DLS для раствора 5-НП . ( D ) Количественная оценка ICP-MS субклеточного распределения Ru и Pt клетками A549. ( E ) Колокализационные изображения 5-НЧ с лизосомным красителем LTG с соответствующими коэффициентами корреляции. (Масштаб: 20 мкм.)

Профиль клеточного поглощения 5-NP в клеточной линии аденокарциномы легкого A549 контролировали с помощью конфокальной лазерной сканирующей микроскопии (CLSM).Сильная красная внутриклеточная эмиссия наблюдалась в клетках A549, инкубированных с 5-NP , с непрерывным увеличением в первые 24 часа инкубации ( SI Приложение , рис. S13), что указывает на успешную локализацию 5-NP в A549. клетки. Специфическое субклеточное распределение 5-NP исследовали с помощью анализа совместной локализации. Красная эмиссия от 5-NPs показала хорошее перекрытие с коммерческим лизосомным красителем LysoTracker Green (LTG) с коэффициентом корреляции (R), равным 0.88 (фиг. 3 E ), что указывает на то, что 5-НЧ могут избирательно накапливаться в лизосомах после попадания в клетки. Напротив, плохое перекрытие наблюдалось для красителя эндоплазматического ретикулума ER-Tracker Green, митохондриального красителя MitoTracker Green и ядерного красителя Hoechst 33342 с низкими значениями R ( SI Приложение , Рис. S14).

Для количественной оценки клеточного поглощения и внутриклеточного распределения 5-NP использовали масс-спектрометрический анализ с индуктивно связанной плазмой (ICP-MS) для определения клеточных концентраций платины и рутения.Зависимые от времени исследования ICP-MS подтвердили, что внутриклеточные уровни рутения и платины достигают максимума через 24 часа инкубации с концентрациями 9,0 мг на миллион клеток и 37,1 мг на миллион клеток для рутения и платины, соответственно (рис. 3 ). D и SI Приложение , Таблица S2). При анализе субклеточного распределения было обнаружено, что лизосомы содержат значительно большее количество рутения (74,0%) и платины (75,2%) по сравнению с эндоплазматическим ретикулумом, митохондриями и ядром, в соответствии с анализом колокализации ( SI Приложение , Таблица S3).Анализ результатов ICP-MS с 5-НЧ показал, что внутриклеточное молярное соотношение рутений: платина близко к 1: 2 среди всех клеточных компартментов ( SI Приложение , таблицы S2 и S3), что указывает на хорошую стабильность Metallacage в сложных физиологических условиях, а также клеточное поглощение и распределение как целостный ансамбль.

(Фото) цитотоксичность по отношению к однослойным опухолевым клеткам.

Цитотоксичность (фото) 5-НЧ 4 и оценивали на однослойных клетках A549 с использованием анализа 3- (4 ‘, 5′-диметилтиазол-2’-ил) -2,5-дифенилтетразолийбромида. и результаты суммированы в SI Приложение , Таблицы S4 и S5.В отсутствие света было обнаружено, что 5-НЧ сильно нетоксичен со значением полумаксимальной ингибирующей концентрации (IC ₅₀ ), превышающим 120 мкМ (на основе концентрации 5 , то же самое для приведенных ниже ), тогда как световое облучение привело к заметному увеличению цитотоксичности 5-НЧ (рис. 4). Также было показано, что жизнеспособность клеток чувствительна к дозировке света. При воздействии очень низкой плотности энергии 6 Дж · см ^-2 было обнаружено, что 5-НЧ обладают высокой цитотоксичностью со значением IC ₅₀ , равным 4.83 мкМ. Низкая цитотоксичность в темноте и высокая (фото) цитотоксичность 5-NPs привели к (фото) индексу цитотоксичности (PI) более 24,8. Значение IC ₅₀ было дополнительно снижено до 1,89 мкМ за счет увеличения световой дозы до 12 Дж · см ^-2 , в результате чего значение PI было больше 63,5. В обоих случаях было обнаружено, что морфология необработанных клеток, подвергшихся воздействию одинаковой дозы света, не изменилась, что указывает на неинвазивность процедуры светового облучения. Напротив, 4 токсичен в темноте (IC ₅₀ = 93.3 мкМ), вероятно, из-за его митохондриальной локализации (32, 33). Более того, (фото) цитотоксичность 4 (IC ₅₀ = 4,93 мкМ) оказалась ниже, чем у 5-NP , что привело к более низкому PI для 4 по сравнению с 5-NP. ; Было обнаружено, что 5-аминолевулиновая кислота (5-ALA), клинически одобренный PS для PDT, демонстрирует более низкую фототоксичность (IC ₅₀ = 111 мкМ) и более низкий PI, чем 5-NPs в аналогичных условиях. Эти результаты предполагают потенциал 5-NPs как эффективных PS с низкими побочными эффектами из-за их лизосомного накопления и высокой эффективности продукции ROS.

Показатели жизнеспособности световых и темных клеток 5-НЧ при различных концентрациях и различной плотности света.

Внутриклеточная генерация ¹ O ₂ с помощью 2-фотонного облучения была подтверждена с использованием клеток A549, инкубированных с 5-NP и 2,7-дихлородигидрофлуоресцеина диацетатом (DCFH-DA). При воздействии 2-фотонного лазера (820 нм, 6,06 мВт, 40 с) наблюдалась внутриклеточная зеленая эмиссия, возникающая в результате окисления DCFH ¹ O ₂ ( SI Приложение , рис.S15), предполагая генерацию ¹ O ₂ внутри клеток путем активации 5-NP .

Производство ¹ O ₂ в лизосомах может привести к неконтролируемой проницаемости лизосом за счет массивного перекисного окисления липидов мембран (67). Целостность лизосом при опосредованной 5-NPs ФДТ исследовали с использованием окрашивания акридиновым оранжевым (АО). В кислых органеллах АО демонстрирует красную эмиссию, тогда как зеленую эмиссию можно обнаружить в цитозоле и ядрах (68).При воздействии 2-фотонного облучения заметное уменьшение красной флуоресценции АО наблюдалось для клеток A549, обработанных 5-НЧ ( SI Приложение , рис. S16), что указывает на 2-фотонную ФДТ, индуцированную разрушением лизосом за счет 5-NPs , тогда как клетки в контрольной группе, которые были облучены одним светом, не были повреждены, поскольку было обнаружено как красное, так и зеленое излучение, что свидетельствует об отсутствии повреждения лизосом, вызванного воздействием света ( SI Приложение , рис. S16). Нарушение целостности лизосом также может привести к высвобождению лизосомальных протеаз, таких как катепсин B, из лизосом в цитозоль, что вызывает апоптоз (26).Внутриклеточное распределение катепсина B до и после 2-фотонной PDT с использованием 5-NPs было обнаружено с помощью анализа окрашивания Magic Red (69). После 2-фотонной PDT наблюдалась красная флуоресценция от диффузии Magic Red из лизосом в цитозоль ( SI Приложение , рис. S17), что указывает на высвобождение катепсина B в цитозоль после повреждения лизосом, опосредованного PDT.

Анализ двойного окрашивания аннексином V / йодидом пропидия (70) был использован для подтверждения того, что 2-фотонная ФДТ с использованием 5-НЧ может эффективно индуцировать апоптоз / некроз.Клетки A549, обработанные 5-НЧ и подвергнутые световому облучению, показали как зеленое излучение аннексина V, так и красное излучение иодида пропидия ( SI Приложение , рис. S18), что указывает на повреждение клеток, опосредованное 2-фотонной световой активацией . 5-НЧ , которые приводят к апоптозу / некрозу. Эти результаты предполагают, что клетки были в некрозе или позднем апоптозе после 2-фотонной ФДТ.

Двухфотонная ФДТ для трехмерных многоклеточных сфероидов.

Чтобы имитировать патофизиологию солидных опухолей in vivo, такую ​​как специфические гипоксические области в опухолевом центре, градиенты пролиферации и барьеры для проникновения лекарств, 3D A549 MCS были использованы в качестве модели для оценки терапевтической эффективности 5 -NPs -опосредованная 2-фотонная ФДТ.3D MCS инкубировали с 5-NP в течение 24 часов с последующей 1-фотонной и 2-фотонной микроскопией изображений Z-stack (Рис. 5 A и SI Приложение , Рис. S19). Двухфотонное возбуждение показало преимущество перед однофотонным возбуждением с большей глубиной проникновения. Однофотонное сканирование Z-стопки показало более слабую люминесценцию на глубине более 120 мм из-за сильного поглощения видимого света тканями. Напротив, сильная красная люминесценция на каждом участке глубины наблюдалась при использовании 2-фотонного возбуждения для сканирования из-за глубокого проникновения длины волны 2-фотонного возбуждения в терапевтическое окно для ткани.

Двухфотонная ФДТ в направлении трехмерных МКС. ( A ) Одно- и двухфотонно активированные изображения Z-стека MCS A549 после инкубации 5-NP . ( B ) Репрезентативные конфокальные изображения MCS, окрашенных кальцеином-AM после различной обработки. ( C ) Репрезентативные долгосрочные изображения MCS после различных процедур. (Масштаб: 200 мкм.)

Эффективность 2-фотонной PDT с помощью 5-NP исследовали с использованием анализа жизнеспособности клеток кальцеин-ацетоксиметил (кальцеин-AM).Кальцеин-AM может различать живые клетки, реагируя с универсальной эстеразой в живых клетках с образованием зеленого флуоресцентного продукта (71). Для группы лечения MCS, совпадающие с 5-NP, и кальцеин-AM, подвергались двухфотонному световому облучению, а CLSM использовался для визуализации MCS (фиг. 5 B ). Сигнал флуоресценции не наблюдался для групп обработки, тогда как сильная зеленая флуоресценция наблюдалась для контрольной группы, MCS совпадали с 5-NP и кальцеином-AM, но не подвергались световому облучению, а MCS, обработанные кальцеином-AM, подвергались только воздействию к световому облучению.Эти результаты показывают, что ни 5-NPs , ни двухфотонное световое облучение не вызывают гибели клеток в MCS, а активация 5-NPs двухфотонным световым излучением эффективно вызывает повреждение MCS.